Суть сепарації дуже просто зрозуміти, якщо згадати, що кров складається з двох складових - кліток крові (Рис.1.5.) і плазми.
Рис.1.5 – Складові кліток крові.
У кожної складової своя задача - еритроцити несуть до кліток організму кисень і живильні речовини, а через плазму від кліток відділяються продукти життєдіяльності, так звані токсини.
Один з таких методів це метод центрифугування:
В основі механізму такої сепарації лежить відмінність щільності еритроцитів від щільності лейкоцитів, тромбоцитів, плазми і різних домішок
Таким чином, швидкість сепарації залежить від щільності клітинних або рідинних складових оброблюваної крові. Еритроцити, частина нейтрофілів, метамієлоцитів і ретикулоцитів є найбільше "щільними" клітинними елементами. Тому вони через особливий пристрій дзвону осідають при центрифугуванні, тоді як менш щільні клітки крові, плазма з розчиненим у ній вільним гемоглобіном, детрит, строма зруйнованих кліток і. т. п. - спливають і віддаляються через спеціальні канали в мішок для відходів.
Процедура продовжується, поки спеціальні датчики не зафіксують рівень гематокрита 60 - 65 %.
Тоді починається наступний етап - відмивання. У той же дзвін центрифуги за допомогою роликового насоса надходить середовище, що промиває - 0,9 % розчин NaCl або розчин Рингера.
Він омиває еритроцити і витісняє забруднену плазму. Повторюється центрифугування, що чистить середовище і плазма з антикоагулянтами і вільним гемоглобіном сепаруються і віддаляються в мішок для відходів.
Процедура повторюється, поки всі небажані домішки не будуть вилучені. Після цього відмиті, концентровані еритроцити за допомогою роликового насоса перекачуються в мішок для готової аутоеритромаси. Після розведення розчином Рингера в співвідношенні 1:1 еритроконцентрат готовий до переливання пацієнтові.
Переваги даного методу очевидні. Оскільки основна маса ускладнень реінфузія зв\'язана з попаданням у кров\'яне русло пацієнта аутоплазми, багатої небажаними домішками, то очищення реінфузата від подібної плазми рятує пацієнта від цих ускладнень Вимиваються не тільки рідкі домішки, але і детрит, мікроагрегати, строма зруйнованих кліток, що значно знижує ризик мікротромбоемболії.
В останні роки найбільш перспективним способом виділення кліток є магнітна сепарація. Створення нового способу виділення кліток актуально як для удосконалювання методів ідентифікації і сепарації субпопуляцій лімфоцитів в експериментальних умовах, так і при розробці нових імунодіагностичних панелей для різних форм гемобластозів.
Метою цього дослідження була розробка методики виділення популяції В-лімфоцитів з периферичної крові донорів за допомогою методу імунномагнітної сепарації.
Протягом 1997-1998 р. у наших дослідженнях використовувалася кров 60 донорів Вітебської обласної станції переливання крові. Проведено три серії дослідів по виділенню лімфоцитів з цільної крові, лейкоконцентрата, суспензії мононуклеарів. У розробленій нами методиці в основу виділення В-лімфоцитів покладений метод поділу кліток по поверхневим мембранним диференційним антигенах за допомогою полістиролових (із включенням магнетиту) мікросфер. Мікросфери, розроблені на основі кон\'югації моноклональних антитіл на поверхні магніточутливих мікроносіїв, вносили к мононуклеарам крові з розрахунку 1:10. У серії досвідів було встановлено, що оптимальною умовою зв\'язування магніточутливих мікроносіїв із клітками-мішенями (В-лімфоцити) є інкубація суміші при 4°С з плином часу 40 хв. Комплекси, що утворяться, (магніточутливих мікроносіїв В-лімфоцит) виділяли за допомогою лабораторного сепаратора БЕЛСЕП-1. Після фіксації і фарбування комплексів проводили облік реакції; позитивно зв\'язаними вважали клітки, що приєднали не менш трьох мікросфер. У результаті проведених досліджень було виявлено, що виділення В-лімфоцитів, що несуть поверхневі антигени, склало 19% від усієї популяції лімфоцитів крові, що статистично вірогідно відрізняється від контролю і відповідає даним закордонних авторів.
Використовуючи процес фільтрації крові - так називаний плазмафорез, учені навчилися цілком вилучати антитіла з крові пацієнтів перед трансплантацією.
http://web-studia.net.ua/
http://web-studia.net.ua/stat1.html
